iElisa 克倫特羅抗生素類檢測試劑盒

iElisa 克倫特羅抗生素類檢測試劑盒

iElisa克倫特羅檢測試劑盒

(C/N: CE2012-G) 

--－北京中檢維康生物技術有限公司

1、檢測原理

本試劑盒是利用競爭ELISA方法，在酶標板微孔上預包被抗克倫特羅抗原。檢測時，加入標準品或樣品溶液，克倫特羅抗體及酶標記物，包被抗原和加入樣本中的克倫特羅競爭性地與克倫特羅抗體結合后，再與酶標記物形成抗原抗體復合物，用TMB底物顯色；加入反應終止液，在450nm波長酶標儀下進行檢測，樣品中的克倫特羅濃度與吸收光強度成反比。

2、檢測范圍

本試劑盒是應用ELISA技術研發(fā)的藥物殘留檢測產品,與儀器分析技術比較，能經(jīng)濟、快速地檢測出尿樣、肌肉、肝臟及飼料等中的克倫特羅。

與類似物的交叉反應率：

克倫特羅&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;100%

特布他林&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;7%

沙丁胺醇&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;25%

鹽酸腎上腺素&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;＜0.1%

去甲腎上腺素&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;＜0.1%

萊克多巴胺&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;＜0.1%

多巴酚丁胺&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;＜0.1%

3、試劑盒組成

1. 酶標板1塊，96孔/板
2. 標準液6瓶（1mL/瓶）：

0 ppb、0.2ppb、0.6ppb、1.8ppb、5.4ppb、16.2ppb

1. 抗體工作液 &河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;9mL
2. 酶標記物 &河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;3mL
3. 底物液A &河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;7mL
4. 底物液B &河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;7mL
5. 終止液   &河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;7mL
6. 說明書 &河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;1份

4、需要但試劑盒中不提供的器材和試劑

（1）設備

1. 微孔板酶標儀(450nm)
2. 振蕩器
3. 離心機
4. 微量移液器：20μL～200μL,100μL~1000μL
5. 容量瓶：100mL，500mL，1000mL

（2）試劑

1. 氫氧化鈉、濃鹽酸、乙酸乙酯、乙腈

5、溶液的配制

樣本前處理需配制：

1. 配液1：0.1M鹽酸溶液

量取0.86mL濃鹽酸加去離子水混勻定容至100mL

1. 配液2：1M鹽酸溶液

量取8.6mL濃鹽酸加去離子水混勻定容至100mL

1. 配液3：0.1M氫氧化鈉溶液（組織樣本）

稱0.4gNaOH加去離子水混勻溶解，定容至100mL

1. 配液4：1M氫氧化鈉溶液（飼料樣本）

稱4.0gNaOH加去離子水混勻溶解，定容至100mL

1. 配液5：乙腈-0.1M鹽酸（組織樣本）

乙腈與0.1M鹽酸溶液按體積比84:16混勻

6、樣本前處理方法

樣本處理前須知

處理任何樣本時，都須注意：

1. 實驗中必須使用一次性吸頭，在吸取不同的試劑時要更換吸頭。
2. 實驗之前須檢查各種實驗器具是否干凈，必須使用潔凈實驗器具，以避免污染干擾實驗結果。

樣本處理步驟：

尿樣

1. 尿樣（若渾濁可以4000轉/分 離心5分鐘，取清亮部分）,取20μL進行分析。
2. 不用時應冷凍保存。

稀釋倍數(shù)為1

畜禽組織（雞、鴨、豬肌肉/肝臟等）

1. 稱取2±0.05 g勻漿的樣品于50mL離心管中，加入6mL乙腈-0.1M鹽酸，振蕩5分鐘；室溫4000轉/分以上離心10分鐘；
2. 取上清3mL，加2mL 0.1M氫氧化鈉溶液，6mL乙酸乙酯，振蕩5分鐘；室溫4000轉/分，以上離心10分鐘；
3. 取全部上清至干凈玻璃試管中，于56℃水浴下氮氣/空氣吹干；
4. 加1mL去離子水復溶，振蕩30秒。
5. 取20μL進行分析。

稀釋倍數(shù)為1。

飼料

1. 用食品粉碎機或乳缽研碎飼料樣品，稱5±0.05 g研碎的飼料樣品，加10mL乙腈；用振蕩器劇烈震蕩5分鐘，室溫3000轉/分離心5分鐘；
2. 取3mL上層清亮有機相至10mL干凈的玻璃試管中，于50-60℃氮氣流下吹干。
3. 加入1mL正己烷，用渦旋儀渦旋30秒；再加入1mL去離子歲混合，用渦旋儀渦旋1分鐘，3000轉/分離心5分鐘；去除上層正己烷相。
4. 取下層20μL進行分析。

稀釋倍數(shù)為1。

7、酶聯(lián)免疫檢測步驟

測定前須知：

1. 使用之前將所有試劑和需用微孔板回升至室溫。
2. 使用之后立即將所有試劑放回2-8℃。
3. 在使用中不要讓微孔干燥。
4. 在ELISA分析中的重復性，很大程度上取決于洗板的一致性，正確的洗板操作是ELISA測定程序中的要點。
5. 在所有恒溫孵育過程中，避免光線照射，用該板膜蓋住微孔板。

測定步驟：

1. 將所需試劑從冷藏環(huán)境中取出，在室溫下平衡30分鐘，每種液體使用前均須搖勻。注意標準液均需做2個平行試驗。
2. 加標準液或樣品液20μL到相應的微孔中，然后加20μL酶標記物，80μL抗體工作液，用膜蓋好，25℃下避光反應30分鐘。
3. 洗板：小心揭開蓋板膜，將孔內液體甩干，加去離子水 250mL/孔，每次浸泡15~30秒，充分洗滌4~5次，用吸水紙拍干。
4. 顯色：每孔先各加入底物液A 50μL，再各加入底物液B 50μL，輕輕晃蕩混勻，并在25℃下避光反應15分鐘。
5. 讀數(shù)：每孔各加50μL終止液，在酶標儀于450nm處測定OD值（建議用450/630nm雙波長檢測，在5分鐘內讀完數(shù)據(jù)）。

8、結果分析    

所測得的標準液或樣品吸光度的平均值（B）除以di一個標準液（0標準液）的吸光度（B<蘇b>0）值再乘以100%，得到百分吸光度值。

百分吸光度值（%）＝B/B<蘇b>0 ×100%

        以標準品濃度的10為底的對數(shù)為X軸， 百分吸光值為Y軸，繪制標準曲線。將樣本的百分吸光值代入標準曲線，從標準曲線上讀出樣本所對應的值，作為10的冪，乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品中所含克倫特羅的量。利用試劑盒專業(yè)分析軟件進行計算，更便于大量樣品的準確、快速分析。/

9、試劑盒靈敏度、準確度、精密度

試劑盒靈敏度：0.1ppb

樣本低檢測限：

尿樣&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;0.2ppb

組織&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;0.4ppb

飼料 &河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;0.4ppb

回收率：

尿樣  &河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;90±10%

組織&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;85±10%

飼料  &河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;&河llip;80±15%

精密度：

 試劑盒的變異系數(shù)均小于10%

10、注意事項

1. 室溫低于20℃或試劑及樣本沒有回到室溫（20-25℃）會導致所有標準的OD值偏低。
2. 在洗板過程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況，則會出現(xiàn)標準曲線不成線性，重復性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應立即進行下一步操作。
3. 反應終止液為2M硫酸，避免接觸皮膚。如不慎滴漏到皮膚上，請盡快用水沖洗。
4. 不要使用過了有效日期的試劑盒；也不要使用過了有效期的試劑盒中的任何試劑，摻雜使用過了有效期的試劑盒會引起靈敏度的降低；不要交換使用不同批號試劑盒中的試劑。
5. 保存試劑盒于2-8℃，不要冷凍，將不用的微孔板放進自封袋重新密封。標準物質和無色的發(fā)色劑對光敏感，因此要避免直接暴露在光線下。
6. 顯色試劑有任何顏色表明發(fā)色劑變質，應當棄之。0標準的吸光度（450nm）值小于0.5（A450nm<0.5 ）時，表示試劑可能變質。
7. 在加入底物液后，一般顯色15分鐘即可。若顏色較淺，可延長反應時間到20分鐘（或更長），但不得超過30分鐘。反之，則減短反應時間。
8. 該試劑盒佳反應溫度為25℃，溫度過高或過低將導致檢測吸光度值和靈敏度發(fā)生變化。

11、貯藏條件及保存期

貯藏條件：在2～8℃保存試劑盒

保存期：本試劑盒有效期為12個月。