維生素B12親和柱能夠特異性的純化樣品中的維生素B12，將樣品與提取液混合、提取、過濾，然后將濾液通過免疫親和柱。此時，維生素B12物質鍵合在親和柱中的抗體上。用蒸餾水將免疫親和柱上的雜質除去。用甲醇通過分離柱，將維生素B12從抗體上分離下來。之后，將過濾的甲醇溶液注入HPLC或LC-MS進行測定。
 

優化：
 

　　維生素B12家族中有四大成員：氰鈷胺、甲鈷胺、腺苷鈷胺和羥鈷胺。自然界中，微生物生物合成的維生素B12最終形式為甲鈷胺、腺苷鈷胺和羥鈷胺；但是由于它們性質不太穩定，所以在工業提純過程中人為地加入氰化鈉，使天然形式的維生素B12轉化為性質更為穩定的氰鈷胺。我們俗稱的維生素B12，是指氰鈷胺，我們食品中添加的維生素B12為氰鈷胺，因此我們檢測食品中的維生素B12只需檢測氰鈷胺，前處理不會用到氰化鉀，具體方法可與我們聯系。
 

　　如應用親和柱方法檢測食品中維生素B12的檢測方法，需要檢測氰鈷胺、甲鈷胺、腺苷鈷胺和羥鈷胺總量的方法，請參考以下方法進行樣品的前處理，然后再應用本親和柱進行凈化
 

　　·AOAC2014.02:Improved_AOAC-FirstAction 2011.08 for the Analysis of Vitamin B12 in Infant Formula and Adult Pediatric Formulas First Action 2014.02(2)
 

　　·GB 5009.285-2022 食品安全國家標準 食品中維生素B12的測定
 

　　·GBT 5009.217-2008 保健食品中維生素B12的測定