2022年最新版食品安全抽檢實施細則更新了針對于牛、羊、豬、雞的肌肉、及肝、腎組織中部分四環素類、磺胺類和喹諾酮類的檢測方法——《GB31658.17-2021動物性食品中四環素類、磺胺類和喹諾酮類藥物殘留量的測定液相色譜-串聯質譜法》，中檢維康參照該標準進行試驗，并優化了部分參數，建立了一份具有良好回收率及穩定性，能滿足國標要求的 SPE-HPLC-MS/MS 方法，可供參考。
 

　　1.樣品提取
 

　　準確稱取粉碎均勻的肉類樣品1g(精確至 0.01 g)于干凈離心管中，加入8 mL Mcllvaine-Na2EDTA 溶液，渦旋混勻后超聲提取 20 min，-5℃下 120000 r/min 離心 5 min，取出上清液于另一干凈離心管，試樣殘
 

　　渣加入 8 mL 磷酸鹽緩沖液，同上述操作，合并兩次提取液，-5℃下 120000 r/min 離心 5 min，上清液待凈化。
 

　　Mcllvaine-Na2EDTA 緩沖液：取檸檬酸·一水 12.9g、磷酸氫二鈉·十二水 10.9g、乙二胺四乙酸二鈉·二水 39.2g,加水 900mL,用 1mol/L 的氫氧化鈉溶液調節 pH 至 5.0±0.2，用水稀釋至 1000mL。
 

　　磷酸鹽緩沖液：取 0.05 mol/L 磷酸二氫鈉溶液 190 mL,用 0.05 mol/L 磷酸氫二鈉溶液稀釋至 1000mL。
 

　　2.樣品凈化
 

　　活化：固相萃取柱依次用 5 mL 甲醇和 5 mL 水活化。（Clover HLB,200mg/6mL）
 

　　上樣：取上述待凈化液加入活化好的固相萃取柱中。
 

　　淋洗：依次用 5 mL 水，5 mL 5%甲醇-水溶液，抽干。
 

　　洗脫：用 8 mL 甲醇：乙酸乙酯：氨水=50:50:2 溶液進行洗脫。
 

　　收集全部洗脫液，45℃下氮吹至 100 μL 左右，加入 0.1%甲酸溶液定容至1mL,過 PTFE 親水濾膜，上機測試。
 

　　3.基質標準曲線溶液的制備
 

　　取 6 個空白基質樣品同正常樣品一樣操作，收集洗脫液后，于洗脫液中分別加入適量標液，再與其他樣品洗脫液一同氮吹，定容，使最終上機溶液的濃度分別為 2 μg/L、10 μg/L、50 μg/L、100 μg/L、200 μg/L、500 μg/L。
 

　　4.儀器條件
 

　　(1)色譜條件
 

　　儀器：UPLC-MS/MS(Thermo Fisher TSQ Endura)
 

　　色譜柱：Hypersil GOLD C18 (2.1 mm×100 mm，1.9 μm)
 

　　流動相：A：水(0.1 %甲酸) B：甲醇：乙腈=2:8(0.1 %甲酸)
 

　　洗脫方式：梯度洗脫，見表 1
 

　　流速：0.3 mL/min
 

　　柱溫：35℃
 

　　進樣量：10 μL

 

　　(2)質譜條件
 

　　子源：HESI
 

　　電噴霧電壓：3500 V
 

　　鞘氣壓力：40 arb
 

　　輔氣壓力：2 arb
 

　　離子傳輸管：380 ℃
 

　　輔氣溫度：350 ℃

 

　　5.實驗結果

 

　　圖1 添加水平為100.0 μg/kg 時豬肉中獸殘的總離子流圖

 

　　圖2 添加水平為100.0 μg/kg 時雞肉中獸殘的總離子流圖
 

　　優化 Tips：
 

　　1.在提取過程中降低離心的溫度至-5℃可以更好的抑制樣品中的脂肪在水溶液表面的分散，有利于樣品的提取轉移。
 

　　2.在超聲提取完合并兩次的提取液之后，再進行一次離心，更好的去除基質的影響，便于上樣過柱。
 

　　3.在淋洗過程中使用 5 mL 5%甲醇-水溶液淋洗液，可以減少在淋洗過程中部分目標物的損失。
 

　　4.標準中氮吹至 100 μL 左右，不氮吹干可以減少在氮吹過程中部分目標化合物的損失。
 

　　5.復溶時，加入 0.1%甲酸溶液定容至 1 mL,可以有效的改善部分目標化合物的峰型，同時提高部分化合物的回收率。6.為了改善上樣后的流速問題，使用  Clover ® HLB( 貨號：HLB2006-M)較普通的 HLB 凈化柱可以獲得更好的流速。
 

　　6.訂購信息